陈盛霞，吴亮，徐会娟，帅连云，傅行礼，仇锦波
【摘要】 目的　制作绦虫玻片染色标本用于教学和科研。 方法 用墨汁染色法制作绦虫妊娠节片玻片标本，卡红染色法制作绦虫成熟节片、头节和囊尾蚴玻片标本。 结果　妊娠节片、成熟节片、头节和囊尾蚴经染色制片后特征结构明显可见。如妊娠节片染色标本清晰可见染成墨汁颜色的子宫主干和分支状的子宫侧支，节片一侧边缘中部可见突出的生殖腔；成熟节片染色标本均染成红色，内有着色更深的雌雄生殖系统各一套。结论　墨汁染色和卡红染色制作带绦虫染色标本效果好,可永久保存。
【关键词】绦虫；染色；标本

寄生虫标本在寄生虫学的教学科研、寄生虫病的诊断和防治工作中发挥着十分重要的作用[1]。将寄生虫各个阶段染色制成玻片标本，可延长标本的保存时间，且可显示原始状态下难以观察的结构，是鉴别寄生虫虫种的重要手段[2]。根据寄生虫标本自身特性，一个永久性标本的制作过程包括固定、染色、脱水、透明和封片等5大步骤。但具体到不同虫种，其实际操作步骤亦有所不同[3]。绝大多数染色方法都较为烦琐，染色质量的好坏与工作经验有着很大的关系。本文介绍绦虫玻片染色标本制作技术。

材料与方法
1　标本来源
牛带绦虫和猪带绦虫成虫来自经驱虫治疗患者排出的虫体，用清水洗去污染物，再浸于清水中8～12 h使虫体松驰；然后将虫体平放于较大的瓷盘中，倒入5%甲醛溶液固定24～48 h，固定后的虫体保存于70%乙醇中，以备染色封片。带绦虫囊尾蚴取自徐州肉联厂。
2　染料和试剂　
炭素墨水购于文化用品商店，卡红粉（Carmine）购于天津光复精细化工研究所，中性树胶购于上海标本模型厂。盐酸、乙醇、二甲苯等购于上海化学试剂总厂。
3　仪器和器材
烘箱（202-2型，上海市实验仪器总厂）、温箱（HH-B11，上海跃进医疗器械厂）、载玻片、盖玻片、镊子、毛笔、注射器、染色缸等。
4 盐酸卡红染液配制
取4 g卡红粉溶于盐酸蒸馏水中（2 ml盐酸中加入15 ml蒸馏水），边加热边搅拌，直至沸腾，再加入85%乙醇95 ml，冷却过滤，加氨水（NH4OH）调节pH至7.0左右后备用。
5 妊娠节片标本制作
取保存于70%乙醇的妊娠节片，清水冲洗2次，用24号针头及2 ml注射器吸取炭素墨水，以左手食指托住妊娠节片，右手持注射器，由妊娠节片的一端正中部位插入子宫主干内徐徐注射。待子宫分支被墨汁充满后，将针拔出，用水洗去节片外面所粘附的墨汁，置于70％乙醇内浸泡1 d。随后将节片夹于两张载玻片之间，并以尼龙线缚紧，浸入80％乙醇内1～2 d。解开尼龙线，仍浸泡于80％乙醇内2～6 h。依次置于90％、95％、100％乙醇内脱水各2～4 h。置于100%乙醇和二甲苯（1∶1）的混合液内1～2 h。再置于二甲苯内至透明。滴中性树胶于载玻片的中央，用小镊子轻轻地将孕节移至树胶中，摆好位置，盖上盖玻片，置40℃左右的干烘箱内烤干，多余的树胶用小刀刮除，贴上标签放入标本盒内。
结　 果
1　妊娠节片染色标本 解剖镜下观察，节片呈长方形，边缘不着色，清晰可见染成墨汁颜色的子宫主干和分支状的子宫侧支，节片一侧边缘中部可见突出的生殖腔。牛带绦虫妊娠节片从子宫主干两侧各分15～30支。
2　成熟节片染色标本　 解剖镜下观察，节片近方形，均染成红色，内有着色更深的雌雄生殖系统各一套。睾丸呈滤泡状，分布于节片背侧，输精管横向延伸至阴茎囊，开口于生殖腔，生殖腔位于节片一侧边缘的中部。卵黄腺团块状，分布于节片的后部中间；卵巢位于节片后1/3中部，分叶状；子宫位于节片中央；阴道位于输精管的后方。牛带绦虫成熟节片卵巢分两叶，左右各一叶；子宫盲端略呈分支状。
3　囊尾蚴染色标本 伸出头节的囊尾蚴呈喇叭状，头节纤细，泡状囊膨大。显微镜下可见猪带绦虫囊尾蚴头节呈球形，4个吸盘，有顶突，上有两圈小钩。
4　头节染色标本 显微镜观察可见猪带绦虫头节呈球形，有4个吸盘，上有顶突及两圈小钩。

讨　 论
绦虫妊娠节片、成熟节片、囊尾蚴和头节经固定、染色、脱水、透明和封片后制作的玻片标本，其形态结构清晰，有利于虫种的鉴定，标本的保存时间也大为延长，方便了教学。永久性染色标本的制作过程较复杂，各个步骤间存在着紧密的联系，其中一个步骤的疏忽就会使制作的标本效果大打折扣。有必要进一步熟悉永久性染色标本的基本原理。
染色步骤完成后应立即进行脱水、透明和封片操作。脱水是用脱水剂将组织内的水分脱尽，以利于组织的透明和制片保存。染色后的标本必须经脱水制片后才能长期保存。在脱水时应逐步进行，否则会引起组织强烈收缩而变形，影响观察效果。卡红染色过程中，如果水分不能完全脱尽，在封片时会使中性树胶变得混浊，不利于观察。标本经脱水等程序后体内仍可能存在一些杂质，会影响光线的透入，不利于观察，必须放置于透明剂中增加透光度。常用的透明剂大都是具有挥发性而不能与水互溶的油类。封片是标本制作的最后一道工序。目的在于使标本能永久的保存，并且便于在显微镜下观察。在封片时所滴加的中性树胶的量十分重要，过量则影响美观，不足则无法使标本与外界空气隔绝，缩短标本的保存寿命。滴加树胶时应先将树胶滴在标本的一侧，然后将盖片从树胶的一侧轻轻盖上，直至完全将标本封在其内。标本经封片后可防止与空气接触，避免被氧化而脱色以及受潮、干裂和损坏。更为重要的是，封片后的标本显得更为充实，其折光率和玻片折光相近，从而可获得更佳的镜检效果。